<NW3214> 外泌体提取纯化试剂盒（多合一）

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<NW3214> 外泌体提取纯化试剂盒（多合一）

外泌体提取纯化试剂盒（多合一）
货号：NW3214-5T；
NW3214-20T
品牌：NoninBio

促销：￥1500.00~5000.00

价格：￥1500.00~5000.00

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规格：

5 T 20 T

产品详细

外泌体提取纯化试剂盒（多合一）

产品编号	产品名称	包装规格
NW3214-5T	外泌体提取纯化试剂盒（多合一）	5T
NW3214-20T	外泌体提取纯化试剂盒（多合一）	20T

产品简介：

外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。由本公司自主开发的外泌体提取纯化试剂盒，组分经过优化处理，适用于细胞培养上清液、血清血浆中的外泌体提取，并搭配纯化过滤装置，可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒，可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

保存条件:

室温保存，2年有效。

产品组成：

名称	NW3214-5T	NW3214-20T
Exosome Concentration Solution*	30 mL	120 mL
Exosome Purification Filter*	5 Tubes	20 Tubes

* Nuclease-free, Sterile

自备材料：

高速离心机，涡旋振荡器，50 mL离心管，1.5 mL离心管，1×PBS缓冲液（无菌）。

产品使用：

一、样品预处理

1. 取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上，如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；

2. 样品初始用量：单次提取时的样品量建议细胞培养上清液不低于20 mL，血清/血浆不低于0.5 mL；

3. 离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于4℃以 3,000 ×g（~6,200 rpm*/~5,200 rpm**）离心 10 min，去除样品中的细胞碎片（注：若沉淀较多，可3,000 ×g，10 min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液）；

*为约7 cm有效离心半径的小离心机换算（≤2 mL离心管），下同。

**为约10 cm有效离心半径的大离心机换算（≥15 mL离心管），下同。

4. 离心去杂质碎片：将离心上清液转移至新的离心管中，于4℃以10,000 ×g（~11,300 rpm*/~9,500 rpm**）离心10 min，去除样品中的杂质碎片；

5. 上清液转移：去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。

二、提取外泌体

1. 上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入 Exosome Concentration Solution（ECS试剂），部分较为粘稠的样品（血清、血浆等），需先加入预冷的1×PBS进行稀释，然后再加入ECS试剂，具体的加入剂量如下（其他剂量请根据表中的用量等比例换算）：

样品名称	样品剂量	PBS剂量	ECS剂量
细胞上清	20mL	—	5mL
血清/血浆	0.25 mL	0.75 mL	0.25 mL

2. 溶液混合：加入 ECS 试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再放置于4℃静置８h以上（注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过24 h）；

3. 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以10,000 ×g（~11,300 rpm*/~9,500 rpm**）离心 60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒（尽可能吸尽上清液）；

4. 再次离心：将含有沉淀的离心管再次于4℃以 10,000 ×g（~11,300 rpm*/~9,500 rpm**）离心 2 min，弃上清（注：尽可能吸尽上清液）；

5. 外泌体重悬：取合适量的1×PBS均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中（建议每20 mL细胞培养上清液或0.25 mL血清/血浆用 200 μL 左右1×PBS重悬）；

6. 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12,000 ×g（~12,400 rpm*）离心2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒（注：若沉淀较多，可12,000×g，2 min离心多次至无明显沉淀，每次取上清液）。

三、纯化外泌体

1. 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 3,000 ×g（~6,200 rpm*）离心10 min，离心后收集 EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒（注： EPF 柱不可重复使用）；

2. 外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。

注意事项：

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！

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