水溶性外泌体荧光标记染料（Aco-800，近红外）

Water-soluble Fluorescent Dye (Aco-800, near-infrared)

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产品简介：

Acoerela 的 Aco-800 属于水溶性、跨膜的共轭寡电解质（COEs）。这类亲脂性染料具备独特性能，能够完全嵌入目标膜的脂质双层，从根源上最大程度减少染料从目标中“泄漏”的情况发生。

在荧光特性方面，Aco-800 只有在与目标膜结合时，才会呈现出显著的荧光增强效果。同时，Aco-800 具有极高的水溶性，溶解在水性缓冲液时，既不会形成胶束，也不会产生纳米颗粒。这一特性使其在纳米流式分析以及体内成像实验中，能够有效规避假阳性结果的出现，确保实验数据的准确性与可靠性。Aco-800 的发射波长（775–818 nm）位于生物组织光学窗口，具有组织穿透深、自发荧光干扰低的优势，特别适用于小动物活体成像和深组织追踪。

产品参数：

溶剂：水性缓冲液（PBS 或 Opti-MEM）

推荐激光器：638 nm（红光）

发射峰范围：775–818 nm

荧光类型：近红外（NIR，肉眼不可见）

常用检测通道：APC / Cy7 / 专用近红外通道

图像伪彩推荐：红色 / 洋红色

保存条件: 

2-8℃避光保存，2年有效。

产品组成：

产品使用：

一、染料工作液制备

1.      取染料管，加入25μL水性缓冲液（推荐使用PBS或Opti-MEM溶解），配置成浓度为 25μM的储存液；

2.      使用涡旋振荡器充分振荡1min 至染料完全溶解；

3.      40°C水浴15min（如有超声设备，可同步开启超声辅助溶解）；

4.      取洁净EP管，对储存液进行分装；

5.      取适量储存液，用缓冲液稀释至10μM的工作浓度。

二、外泌体染色

1.      将纯化的细胞外囊泡(EVs)浓度调整至10¹¹ Particles/mL；

2.      按表1构建染色孵育体系：

表1. Aco-800标记外泌体（EV）的样本制备50μL体系

3.      加入染料工作液后，盖紧离心管盖，用枪头轻柔吹吸混匀，放置于37℃环境，避光孵育2小时。

三、去除游离染料

1.      染色完成后，在样品中加入2倍体积的PBS，使用100 KDa超滤管*，以3000 ×g的离心力离心 5~10min，进行超滤置换，去除溶液中游离的染料，将上室样品浓缩至原体积；

2.      重复上述超滤置换步骤 2 次；

*注：完成本次实验后，请丢弃超滤管，切勿留作下次实验重复使用。

3.      收集超滤管上室的样本，即为染色后的外泌体；

4.      染色后的外泌体建议尽快使用，若在2周内使用，可置于 4℃ 环境中避光保存；如需长期保存，可置于-80℃冷冻保存，保存时间过长可能影响下游实验效果。

四、 小动物活体成像应用

1.      动物注射

1.1 将染色后的EVs用无菌PBS稀释至合适浓度 （推荐 1×10¹⁰ particles/100μL/只）。

1.2 通过尾静脉注射入小鼠体内（或其他给药方式）

1.3 注射后按设定时间点（如 1 h、4 h、8 h、24 h）进行活体成像。

2.      活体成像采集

激发光：638 nm / 640 nm / 660 nm

发射光收集：770–820 nm（近红外通道）

仪器推荐：IVIS Spectrum / Lumina 系列，或其它配备近红外检测模块的小动物成像系统采集参数：曝光时间自动/手动，binning 4–8，f/stop 2

3.      器官离体成像（可选）

3.1 成像结束后处死动物，收集主要器官（肝、脾、 肾、肺、心、脑等）。

3.2 用 PBS 清洗后，直接置于成像系统中进行离体成像。

3.3 离体成像可更精确评估EVs在各器官的分布。

4.      数据分析

4.1使用仪器配套软件（如 Living Image）量化各器官的荧光信号强度。

4.2计算各器官的分布百分比，绘制生物分布图。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请注意全程避光，以减缓荧光淬灭。

2.      染料工作液应现配现用，不能提前配制，否则将影响染色效果。

3.      Aco-800染色固定细胞时，样品宜使用4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

4.      Aco-800不耐受去垢剂，避免使用含Triton X-100、SDS等去垢剂的缓冲液。

5.      Aco-800为近红外染料，肉眼不可见，需使用配备近 红外检测器的成像系统进行信号采集。

6.      关于外泌体染色后去除游离染料：外泌体染色步骤中去除游离染料的步骤必不可少，以避免游离染料对后期实验的干扰。为保证超滤后有足够的外泌体回收量，建议用于染料标记的外泌体原始浓度达到 10¹¹ Particles/mL。

7.     Aco-800的荧光为什么肉眼看不到？Aco-800 的发射峰在775–818 nm，属于近红外波段， 超出人眼可见范围（380–700 nm）。需要使用配备近红外检测器的成像系统（如小动物活体成像仪、共聚焦显微镜）进行采集，图像中通常会赋予红色伪彩以便观察。

8.      Aco-800 适合做什么实验？ 由于其近红外特性，Aco-800 特别适合：小动物活体成像（组织穿透深）；深层组织切片的共聚焦成像；需要避开可见光自发荧光的实验；多色标记中需要远红/近红外通道的场景。

9.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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