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  • CFDA, SE,英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester,CAS NO. 150347-59-4,是一种稳定的、细胞膜渗透性的非荧光染料,由两个醋酸基团和一个琥珀酰亚胺酯(SE)官能团组成的一个荧光分子。一旦主动扩散进入细胞,其醋酸基团被胞内酯酶切割,生成荧光素酯CFSE。CFSE具有高度荧光,且能通过其琥珀酰亚胺酯基团共价结合到细胞内的蛋白氨基基团。正是这个共价偶联反应,CFSE能够极其长期的保留在细胞内,长达数个月。另外,归因于这一稳定连接,一旦染料进入细胞,不会转移到邻近细胞。无活力细胞仍然是非荧光。而活细胞一旦分化,CFSE能够很均匀的分散到子细胞中,每分裂一次子代细胞约能得到亲本细胞1/2的荧光强度,因此,通过流式细胞仪对荧光强度的检测,能够依次分选出未分裂细胞,分裂一次的细胞(1/2荧光强度),分裂两次的细胞(1/4荧光强度),分裂三次的细胞(1/8荧光强度),以及以此类推其他分裂次数的细胞。CFSE可以检测分裂多达8次或更多次数的细胞增殖。
  • 活性氧(Reactive oxygen species, ROS)是一类含氧的化学性质活跃分子,包括超氧化物、羟基自由基、单线态氧和过氧化物。由于存在未配对价壳电子,ROS具强反应性。ROS在细胞信号通路和稳态中发挥重要的作用,在氧的正常代谢下形成天然副产物。然而,在环境应激比如紫外照射或热曝光,ROS水平急剧上升,对细胞结构造成显著损伤,这就是所谓的氧化应激(Oxidative stress)。处于氧化应激条件下,ROS产量急剧提高,引起下游的膜脂质、蛋白和核酸发生结构变化。这些分子的氧化损伤与衰老以及大量病理事件相关,包括动脉粥样硬化、癌变、缺血再灌注损伤和神经衰退紊乱。
  • 活性氧(Reactive oxygen species, ROS)是一类含氧的化学性质活跃分子,包括超氧化物、羟基自由基、单线态氧和过氧化物。由于存在未配对价壳电子,ROS具强反应性。ROS在细胞信号通路和稳态中发挥重要的作用,在氧的正常代谢下形成天然副产物。然而,在环境应激比如紫外照射或热曝光,ROS水平急剧上升,对细胞结构造成显著损伤,这就是所谓的氧化应激(Oxidative stress)。处于氧化应激条件下,ROS产量急剧提高,引起下游的膜脂质、蛋白和核酸发生结构变化。这些分子的氧化损伤与衰老以及大量病理事件相关,包括动脉粥样硬化、癌变、缺血再灌注损伤和神经衰退紊乱。
  • CM-H2DCFDA,英文全名:5-(and 6-)chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester,中文全名:5-(and 6-)氯甲基-2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸乙酰酯,是一种通用的氧化应激指示剂,是H2DCFDA(DCFH-DA,货号:NBS6702)的氯甲基衍生物,在活细胞中表现出更好的滞留率。CM-H2DCFDA具细胞膜渗透性,主动扩散进入胞内,其乙酸酯基团被细胞内酯酶切割,其硫醇反应性的氯甲基基团与细胞内谷胱甘肽和其他硫醇发生反应。后续氧化产生荧光加合物被捕获在细胞内,从而有助于长期研究。通过流式细胞仪、荧光计、荧光酶标板或荧光显微镜(配有适用于荧光素的激发光源和滤光片)对荧光信号进行监测。
  • 荧光素-5-马来酰亚胺(Fluorescein-5-maleimide)是一种活化的荧光分子(Ex/Em=494/518nm),能非常容易的将荧光素连接到蛋白上。马来酰亚胺基团在pH 7的最佳体系内与半胱氨酸侧链上的巯基基团反应,形成一稳定的硫醚键。马来酰亚胺基团在pH 7时与游离巯基反应活性比胺基强~1000倍。而在pH>7.5与伯胺的反应活性提高,且会发生马来酰亚胺基团水解现象。荧光素-5-马来酰亚胺能用来标记蛋白,用于检测构象变化,多亚基复合物的组装和配基结合过程。
  • ABD-F,英文全名4-(Aminosulfonyl)-7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole,中文全名4-(氨磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并恶二唑,是一种高反应活性、灵敏的荧光试剂,用于巯基标记。选择性标记蛋白半胱氨酸残基,不用侧链修饰或N端封闭。ABD-F含有苯并呋喃功能基团,通过与一个巯基基团反应产生一种强荧光化合物(反应机理见下图),最大激发和发射波长分别为389nm和513nm。据报道,ABD-F还能与一些酪氨酸残基的羟基基团和某些蛋白的氨基基团缓慢发生反应,生成不带荧光的产物,但能在385nm的吸收峰处检测到。ABD-F还是一种血管舒张药。
  • 单溴二胺(Monobromobimane,mBBr)是一种巯基反应的荧光探针,具有细胞膜渗透性,生理pH下与接触到的巯基基团快速反应,产生一个稳定的荧光信号。mBBr可用来评估或定量一系列含活性硫或巯基基团的化合物,包括硫化氢(H2S),谷胱甘肽,蛋白和核苷酸。特别适合用于谷胱甘肽的定量。mBBr的最大吸收和发射波长分别为395nm和490nm。
  • 萤光黄尸胺(Lucifer Yellow Cadaverine),和萤光黄CH(Lucifer Yellow CH)类似,是一种可固定的荧光示踪剂。另外,萤光黄尸胺还能用于偶联羧酸基团。
  • 萤光黄CH(Lucifer Yellow CH, LY-CH)是一种强荧光染料,长期被用于标记神经细胞。与萤光黄VS(Lucifer Yellow VS)相比,萤光黄CH包含一个碳酰肼基团,在醛类固定过程中能共价结合到周围的生物分子上。作为一种生物示踪剂,来监测神经元的分支形态和再生、间隙连接和鉴定,以及醛类固定后的选择性细胞消融。这种极性示踪剂和其它相似的非膜渗透性染料往往通过微注射、胞饮作用、划痕标记、ATP诱导的跨膜或渗透压冲击来完成加载。
  • 萤光黄CH钾盐(Lucifer Yellow CH Potassium salt)是一种强荧光染料,用于标记神经细胞和示踪细胞间的连接。与萤光黄VS(Lucifer Yellow VS)相比,萤光黄CH包含一个碳酰肼基团,在醛类固定过程中能共价结合到周围的生物分子上。萤光黄CH钾盐能用于可视化细胞形态,以及细胞内标记记录神经元。这种极性示踪剂和其它相似的非膜渗透性染料往往通过微注射、胞饮作用、划痕标记、ATP诱导的跨膜或渗透压冲击来完成加载。