DiI (DiIC18(3))细胞膜橙红色荧光探针（NBS5129）
DiI (DiIC18(3))细胞膜橙红色荧光探针（NBS5129）
货号：NBS5129
规格：5mg
品牌：NoninBio
DiI (DiIC18(3))细胞膜橙红色荧光探针
产品描述
DiI, DiO, DiD和DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后，它们在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。
四种染料呈现不同的荧光颜色，DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。其中，DiI及其衍生物由于极其低的细胞毒性，应用最为广泛。不仅普遍用于活体和固定组织及细胞的神经元逆行性和顺行性示踪分析，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程的细胞迁移，通过FRAP（荧光光漂白恢复技术）检测脂质在细胞膜上的扩散过程，检测细胞毒性，以及标记脂蛋白如LDL和HDL等。
DiI (DiIC18(3)) 是一种亲脂性膜染料，通常用作神经元和其它细胞的长期示踪剂。DiI 在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的橙红色荧光 (λex=549 nm，λem=565 nm)。
DiI基本特性：
1) 别名：DiI perchlorate; DiIC18(3)
2) CAS NO：41085-99-8
3) 分子式：C59H97ClN2O4
4) 分子量：933.87 g/mol
5) 纯度：≥99%（TLC）
6) 溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
7) 外观：红色至暗红色，紫色至深紫色粉末
8) Ex/Em：549/565 nm（in phosphate buffer/SDS pH 7.0）
9) 推荐滤光器：Omega- XF108, XF32, Chroma-41002, 31002
保存与运输方法
保存：粉末：-20ºC避光保存，有效期3年；
溶剂中：-80°C避光保存，有效期1年。
运输：冰袋运输。
溶液配制表
DMSO
1mg | 5mg | 10mg | 50mg | |
1 mM | 1.0708 mL | 5.3541 mL | 10.7081 mL | 53.5406 mL |
5 mM | 0.2142 mL | 1.0708 mL | 2.1416 mL | 10.7081 mL |
10 mM | 0.1071 mL | 0.5354 mL | 1.0708 mL | 5.3541 mL |
20 mM | 0.0535 mL | 0.2677 mL | 0.5354 mL | 2.6770 mL |
使用方法
【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。
1.染色液制备
1）储存液制备：用DMSO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取5mg DiI（Mw：933.87 g/mol）溶于1.07ml无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】 未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。
2.悬浮细胞染色
1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。
3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
5）再重复3），4）步骤两次。
3.贴壁细胞染色
1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。
3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。
5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。
4、显微镜检测
1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见下表：
荧光探针 | 最大激发/最大发射波长（Ex/Em） | 滤光片编号 | |
Omeaga公司 | Chroma公司 | ||
DiI | 549/565 nm | XF108，XF32 | 41002，31002 |
DiO | 484/501nm | XF100，XF23，41001，31001 | 41001，31001 |
DiD | 644/665 nm | XF110, XF47 | 41008，31023 |
DiR | 750/780 nm | XF112 | 41009 |
2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；
5、流式细胞仪检测
经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。
注意事项
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
公司名称：上海诺宁生物科技有限公司
联系地址：上海市闵行区虹梅南路2588号绿亮科创园A531
邮政编码：201100
联系订购：021-61241614 18616364863
联系 Q Q：392324729
E-mail：noninbio@163.com