RIPA Lysis Buffer（strong） RIPA 裂解液（强）（NBS6511）

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RIPA Lysis Buffer（strong） RIPA 裂解液（强）（NBS6511）

RIPA Lysis Buffer（strong） RIPA 裂解液（强）
货号：NBS6511
规格：100ml
品牌：NoninBio

促销：￥220.00

价格：￥270.00

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规格：

100ml

产品详细

RIPA Lysis Buffer（strong）

RIPA 裂解液（强）

产品编号	产品名称	包装规格
NBS6511	RIPA裂解液（强）	100ml

产品简介：

RIPA裂解液是一种经典的细胞组织快速裂解液，对动物细胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用，裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液（强）的主要成分为50mM Tris-Hcl（pH7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及 sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用说明：

对于培养细胞样品：

1、融解RIPA 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使 PMSF的最终浓度为1 mM。

2、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：

1、把组织剪切成细小的碎片。

2、融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使 PMSF的最终浓度为1mM。

3、按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

4、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

6、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

注意事项：

1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、需自备PMSF。

3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4、可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃保存，一年有效。