杀稻瘟菌素S(灭瘟素)(10mg/ml)
Blasticidin S (10mg/ml)
产品简介:
杀稻瘟菌素S(Blasticidin S)是一种分离自灰色链霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的核苷肽类抗生素,通过特异性干扰核糖体肽键形成,强效抑制原核与真核细胞的蛋白质合成。本品主要用于筛选携带bsr或BSD耐药基因的转染细胞,具有起效迅速、作用强劲的特点,通常一周内即可完成阳性克隆筛选,且极低浓度即可快速杀灭敏感细胞。
本品为溶于HEPES缓冲液(pH7.5)的即用型无菌溶液,浓度10mg/ml。细菌筛选常用浓度为25–100μg/ml,哺乳动物细胞筛选常用浓度为1–50μg/ml。初次实验建议通过杀灭曲线确定最佳工作浓度,以实现筛选效率与成本的最优化。
保存条件:
-20℃保存(一年有效)
产品特性:
1) 同义名:Blasticidin S Hydrochloride; 灭瘟素S盐酸盐; 稻瘟散;
2) CAS NO.:3513-03-9
3) 分子式:C17H26N8O5·HCl
4) 分子量:458.9
5) 纯度:>95%(HPLC)
6) 化学结构式:
产品使用:
1. 大肠杆菌(E. coli)筛选(推荐浓度:25–100 μg/ml)
大肠杆菌对Blasticidin S天然敏感性较低,但携带bsr或BSD抗性基因的转化子可在低盐LB固体培养基(pH 8.0)中,采用100μg/ml Blasticidin S进行高效筛选。注意:适当提高pH值(至8.0)可显著增强抗生素的筛选活性,提高阳性克隆检出率。
2. 哺乳动物细胞筛选(常用浓度:1–50μg/ml)
哺乳动物细胞系Blasticidin S的推荐工作浓度范围为1–50μg/ml。由于不同细胞系对抗生素敏感性差异较大,初次实验强烈建议通过杀灭曲线(kill curve)确定最佳筛选浓度,以实现高效筛选并最大限度降低对细胞毒性。
一些哺乳动物细胞的建议工作浓度:
细胞系 | 培养基 | Blasticidin S筛选浓度 |
CHO | DMEM | 5-10μg/ml |
HEK293 | DMEM | 5-15μg/ml |
HeLa | DMEM | 2.5-10μg/ml |
Neuro2a | DMEM | 30μg/ml |
B16 | RMPI | 3-10μg/ml |
PC1.0 | RMPI | 10-30μg/ml |
THP-1 | RMPI | 10μg/ml |
筛选步骤:
1)转染48h后,用含适宜浓度Blasticidin S的新鲜培养基进行传代培养。
【注】:抗生素在细胞活跃分裂期发挥最佳效应,细胞密度过高会降低筛选效率,传代时细胞汇合度建议控制在25%以内。
2)随后每3–4天弃去旧培养基,加入含相同浓度Blasticidin S的新鲜培养基,持续维持选择压力。
3)7天后观察并评估细胞克隆形成情况。根据细胞类型及转染/筛选效率,克隆形成时间可适当延长至14天或更久。
4)挑取5–10个抗性细胞克隆转移至35 mm细胞培养皿中,继续用选择培养基维持培养7天,随后可进行细胞活性或功能检测。
注意事项:
1. Blasticidin S为有毒化合物,操作时需注意防护,切勿与身体或皮肤直接接触。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于生命科学研究,不得用于医学诊断及其他用途!
常用筛选抗生素及其使用浓度:
货号 | 名称 | 抗性基因 | 有效筛选浓度(µg/mL) |
大肠杆菌潮霉素抗性基因 (hyg,hph) | 哺乳动物细胞:200-500 细菌/植物细胞:100-300 真菌:300-1000 | ||
蜡样芽孢杆菌的bsr基因 土曲霉的BSD基因 | 哺乳动物细胞:1-10 大肠杆菌:25-100 | ||
Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) | 酵母菌:10 丝状真菌:25-150 | ||
Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) | 哺乳动物细胞:50-1000 大肠杆菌:25-50 酵母菌:50-300 | ||
Tn601 (903)或Tn5来源的新霉素抗性基因(neo) | 哺乳动物细胞:200-2000 植物细胞:10-100 酵母细胞:500-1000 网柄菌属:10-100 | ||
链霉菌来源的嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因(pac) | 哺乳动物细胞:1-10 大肠杆菌:100-125 |