0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)(NBS0461)

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0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)(NBS0461)

0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)
货号:NBS0461
规格:10ml
品牌:NoninBio
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10ml

 

0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)

 

0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)

货号:NBS0461

规格:10ml

品牌:NoninBio


TCEP-HCl的化学结构式








产品简介:

TCEP即TCEP-HCl,全称Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride,中文名为三(2-羧乙基)膦盐酸盐。分子式为C9H15O6P·HCl,分子量为286.65CAS51805-45-9。本产品为0.5M TCEP溶液,用NaOH调节pH值至6.8,常作为DTT的替代物用于蛋白上样缓冲液和其它还原试剂的配制。在SDS-PAGE电泳中,一般终浓度在25mM左右的TCEP即可足够还原蛋白样品。TCEP使用范围广泛,无论是普通的SDS-PAGE中蛋白的还原,还是一些特殊的实验如固相金属离子亲和层析(IMAC)、质谱、Ni柱纯化等其它需要还原二硫键的实验,也特别适用于组氨酸标记蛋白纯化、马来酰亚胺偶联半胱氨酸残基反应,它能够预防半胱氨酸残基形成二硫键,但不像DTT或β-巯基乙醇本身易与马来酰亚胺反应。

 

保存条件:

-20℃或4℃保存,至少1年有效。


注意事项:

1.      本产品用于蛋白变性时,建议95℃水浴或PCR仪加热5分钟,温度过高(100)或时间过长(如超过15分钟),有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。

2.      本产品在磷酸盐缓冲液中,尤其在中性或碱性磷酸盐缓冲液中很不稳定。因此若实验过程需将本产品配制在PBS缓冲液中使用,必须现配现用。

3.      大多数蛋白无需变性剂即可高效还原,但加入盐酸胍等变性剂有助于将内部二硫键暴露而易于和TCEP发生反应。

4.      不建议使用尿素作为变性剂,避免形成氰酸酯并与巯基反应。

5.      尽量防止金属接触TCEP溶液,否则会一定程度降低TCEP活性。在还原过程中向样品缓冲液中加入520mM EDTA有助于防止巯基被二价金属离子氧化,如Zn2+Cu2+Mg2+等。

6.      还原后样品应尽快使用,长时间放置后会重新生成二硫化物。

7.      本产品在溶液中带电荷,因此不适用于等电聚焦(IEF)实验。

8.      TCEP对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

9.      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

产品使用:

1.      在不含DTT或β-ME2×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(100mM Tris20%甘油,4% SDS0.005%溴酚蓝,pH6.8)中加入本产品, 至TCEP终浓度为50mM,吹打或斡旋混匀。

2.      将等体积的上述2×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液与蛋白提取液加入到新的离心管中并混匀,沸水浴中煮5min

3.      样品冷却后,在离心机中瞬离,然后取上层溶液进行Western blot实验。