Annexin V-APC/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒

产品简介：

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细 胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋 亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V 进行荧光素APC标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V-APC与PI匹配使用， 就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×10⁵，不推荐用于检测组织样本。

保存条件: 

4℃避光保存，1年有效。Annexin V-APC建议按需分装冻存于-20℃，避光保存及使用，避免反复冻融。

产品组成：

产品使用：

1、细胞收集

（1）悬浮细胞：2000rpm，离心5min收集。

（2）贴壁细胞：贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集。

注意：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性。

2、用PBS洗涤细胞两次（2000rpm，离心5min）收集1~5×10⁵细胞；

3、加入500μl的Binding Buffer轻轻吹匀成单细胞悬液；

4、加入5μl Annexin V-APC和5μl PI染液，轻轻吹匀；

5、室温避光反应5～10min；

6、请在1h内，进行流式细胞仪的观察和检测。

7、流式细胞仪分析

（1）用流式细胞仪检测，APC激发波长Ex=633nm；发射波长Em=660nm，红色荧光，建议使用FL4通道检测；PI激发波长Ex=488nm；发射波长Em≥630，通过FL2或FL3通道检测，建议使用FL3。

（2）荧光补偿调节：使用经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱 重叠和设定十字门的位置。

注意事项：

1.      微量试剂需离心数秒，将试剂收集至管底后再开盖取用。

2.      Propidium Iodide（PI）有毒，操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。

3.      推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮刀会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后的细胞保存在含2% BSA的PBS中，防止进一步的损伤。

4.      细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。

5.      因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

6.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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