pH荧光探针（红600-乳胶微珠偶联物）

产品简介：

pH Red 600-乳胶微球偶联物展现出显著的pH依赖性荧光特性。与多数在碱性条件下荧光更强的传统染料不同，该偶联物在酸性环境中荧光信号会显著增强。当pH从中性降至酸性范围时，其荧光强度呈现急剧升高，这一特性使其成为研究吞噬作用及其受药物/环境因素调控的可靠工具。

该偶联物在细胞外仅呈现微弱荧光（无需洗涤步骤），但在吞噬体、溶酶体和内体等酸性区室中会发出明亮的红色荧光。这种独特的"酸性激活"特性使其能够：精准示踪吞噬过程；与GFP、Fluo-8、钙黄绿素或FITC标记抗体等绿色荧光探针联用，实现多功能细胞分析；该产品特别适用于免疫学研究、药物开发，以及先天免疫功能、自噬或颗粒内吞等机制研究。

产品特性：

1)     分子量：N/A

2)     固体含量：1% in PBS

3)     每毫升微球数量：~4e+10

4)     溶解度：在水中溶解

5)     Ex(nm)：576

6)     Em(nm)：597

7)     平均直径：0.72 µm

pH荧光探针（红600）的pH依赖性发射光谱

保存条件: 

-20℃避光保存，2年有效。

产品使用：（仅供参考）

1.      将粒细胞重悬于含20 mM Hepes的Hanks缓冲液（HHBS）中，调整浓度至10⁷ cells/mL，取100 μL细胞悬液加入聚丙烯离心管。

注：最佳细胞密度需根据细胞系特性单独评估。

2.      向离心管中加入1-10 μL pH Red 600-乳胶微球偶联物，37°C温和振荡孵育30分钟

注：合适的孵育时间需根据细胞系特性优化。

3.      准备一个相同的样品，在4°C下孵育作为对照。

4.      孵育30分钟结束时，通过加入2mL冰冷的HHBS终止吞噬作用。混合，然后用冷HBSS洗涤细胞2次。

5.      将细胞重悬于500 μL冷HBSS中，将样品保持在 4°C，并立即使用配备Texas Red滤光片组的荧光显微镜进行分析。

注意：若使用荧光酶标仪，检测参数设为：激发/发射=570/600 nm（截止波长585 nm）

实验结果：

图：通过pH Red 600-乳胶微球偶联物在RAW 264.7细胞中检测吞噬作用。将细胞在生长培养基中与pH Red 600-乳胶微球孵育4小时。使用Cell-Tracker Green CMFDA（货号NBS5138）追踪活细胞。该图像（20X）使用Keyence荧光显微镜拍摄。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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