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全细胞内参抗体

Anti GAPDH Antibody-HRP

产品介绍 

GAPDH的分子量为146 kDa，由4个30-40 kDa的亚基组成。该酶是糖酵解反应中的一个关键酶，其主要功能是催化3-磷酸甘油醛氧化 （脱氢）和磷酸化，生成1,3-二磷酸甘油酸。由于GAPDH广泛分布于各种组织中，几乎在所有组织中都高水平表达，且表达量相对恒定， 不受外部诱导物的影响，故被广泛应用于qPCR、WB等实验的标准化内参。Anti GAPDH Antibody-HRP是通过一定的工艺将辣根过氧化 物酶 (HRP) 偶联至GAPDH抗体上，进行WB实验时加入发光液A和B，一般是鲁米诺和过氧化氢，在辣根过氧化物酶 (HRP) 的催化 作用下，鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定随即分解，形成一种能发光的电子激发中间体，当后者由激发态返回 至基态，就会产生荧光，实现对GAPDH内参蛋白的检测。 

基本信息 

抗体来源：重组抗体 

交叉反应：人、大鼠、小鼠、植物、酵母等 

克隆类型：单克隆抗体 

偶联物：辣根过氧化物酶 (HRP) 

纯化方式：rProteinA亲和纯化 

储存缓冲液：1×PBS (pH7.4)，0.05% proclin 300，50% 甘油 

储存条件

干冰运输，-20℃可保存2年，避免反复冻融

产品应用 

WB=1:3000-1:10000

注意事项 

1) 本产品为HRP直标抗体，需要避光保存于-20℃或者-80℃中； 

2) 本产品灵敏度高，WB稀释比值请按照说明书进行，否则可能会出现非特异性条带； 

3) PVDF 膜在转膜前需要用甲醇激活，转膜后抗体稀释液尽量过量，转膜和抗体孵育过程中不要产生气泡； 

4) 本品在37℃下孵育30-60min即可产生很明显的信号，常温孵育可适当延长时间。

参考信息 

1) 样本信息：Vero、BHK、293、Jukat、Hela、K562、NIH/3T3、CHO和EL4-B5细胞系； 

2) 样品处理：3×106细胞PBS清洗三次后加入1mlPBS重悬，取10μl重悬液加入10μl 2×loading Buffer，100℃高温煮沸10min； 

3) 上样体积：10μl（含2×loading buffer）； 

4）抗体稀释比值：25ml抗体稀释液中加入0.5μl Anti GAPDH Antibody-HRP抗体（1:5000）； 

5) 抗体孵育条件：37℃摇晃孵育30min；

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