EZ poly™in vivo mRNA活体转染试剂

产品简介:

EZ poly™in vivo mRNA活体转染试剂是一款体内专用型基因转染试剂，可通过肌肉注射的方式将mRNA递送传送至体内并在注射部位高效表达目的蛋白。与其它mRNA专用体内转染试剂相比，具有操作简便、体内毒性低、稳定性好、体内转染效率及蛋白表达量高等优点。

应用范围:

EZ poly™in vivo mRNA活体转染试剂可被应用于mRNA疫苗研发或基因治疗等相关工作的研究中。可用于递送荧光标记的mRNA或具有特殊功能的mRNA，并在体内高效表达。可满足基础科研、初期工艺开发及临床前实验研究使用。

保存条件: 

2-8℃保存一年

运输：

常温运输

体内转染方法:

以体重20g小鼠，mRNA注射10µg为例，参考表1调整，步骤如下：

体内转染条件的优化:

可通过改变mRNA的用量和浓度以及EZ poly™in vivo mRNA活体转染试剂体内转染试剂浓度对体内分布或蛋白表达情况进行优化。EZ poly™in vivo mRNA活体转染试剂(µL): mRNA (µg)可以在4:1和2:1之间调整。根据鼠体重的不同，葡萄糖注射液的补加体积可以在推荐量±30µL之间调节。优化方法参考表2。使用荧光标记mRNA的活体分布实验，建议在注射后4-6小时开始检测，荧光素酶标记mRNA的活体分布实验，建议在注射后6小时开始检测。

表1.  不同体重鼠的体内用量推荐

表2.  体重20g鼠的优化复合方式推荐

一：转染效率低

影响细胞转染效率的因素有很多。首先，与所转染细胞有关，有的细胞容易转染，如HeLa、B16F10、293T等。有的细胞不易转染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，与转染试剂的用量及与DNA的比例有关，在最佳的转染比例附近可以达到最佳的转染效果。最后，没有使用最适宜的细胞密度，应根据各种转染试剂的说明书中推荐的细胞密度进行细胞接种，更有利于提高转染效率。

二：转染效果不稳定，不能重现

转染效果不稳定一般与两个因素紧密相关，一个是转染试剂的稳定性，另一个是基因的稳定性。转染试剂应按照说明书建议的保存温度及条件进行保存。如使用脂质体类的转染试剂，则不建议反复冻融，会引起该转染试剂结构上的变化。基因如短时间内连续使用，可放置于4℃保存。若超过10天不使用，建议置于-20℃或-80℃长期储存以降低核酸的降解速度。

三：细胞毒性大

导致转染时细胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量过大、转染试剂的用量过大、转染时细胞状态较差以及培养基中抗生素的加入等。建议严格按照所选择转染试剂的说明书进行操作，以避免细胞毒性大的问题。

四：没有生成高效率的DNA转染试剂复合物

没有生成高效复合物的因素有很多。首先，可能是没有选对合适的转染试剂。挑选转染试剂时应考虑基因的种类及分子量等因素。其次，有的转染试剂对血清的影响很大，应在无血清情况下进行转染。使用诺宁生物的EZ poly™  系列转染试剂无需考虑血清对转染体系的影响，可在含血清培养基中进行转染。

五：使用错误的转染操作步骤

无论使用哪一款基因转染试剂，都应严格按照该转染试剂的说明书进行操作，其中包括转染试剂的用量、基因用量、最佳转染比例、孵育时间、检测时间等重要因素。

六：转染试剂有时呈云雾状浑浊

如发现转染试剂出现云雾状浑浊应立即联系客服人员。基因转染试剂一般都呈清澈透明状态，呈云雾状浑浊可能是由于转染试剂发生了污染或储存温度太低，请务必按照试剂说明书要求的温度进行储存。如出现此现象，建议温浴10分钟后，观察是否澄清。

七：转染复合物出现沉淀

当转染试剂和基因的用量都高于说明书用量，或复合物的孵育体系体积小于说明书建议时，由于体系中过量的电荷发生了聚集会导致体系中的复合物出现沉淀。建议要严格参考说明书的用量进行转染。

八：siRNA转染时，基因沉默效率不够高

影响siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被环境中的RNA酶污染降解？或所使用的细胞是否为难转染细胞？以及是否按照说明书建议的用量进行了操作等。首先应该选择合适的siRNA基因转染试剂，确保细胞密度在60-70%之间，并严格按照说明书建议的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共转染时，基因沉默效率不够高

当细胞同时转染DNA和siRNA时，建议使用分别转染的方式进行。即使用基因转染试剂分别与DNA和siRNA进行复合，再将两个复合物体系分两次分别加入到同一个装有细胞的实验孔中。因DNA和RNA的转染机理不相同，如只想使用一种转染试剂同时转染两种基因，建议一定要使用通用型基因转染试剂，如EZ poly™ 系列的DNA/RNA产品，即可以转染DNA又可以转染RNA。