DH5α感受态细胞

产品简介

本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108个转化子/μg质粒DNA，-70℃保存3个月转化效率可保持在90%以上。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。

基因型：F-，φ80lacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169， recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1

产品组分

产品特点

DH5α菌株一种常用于质粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

保存条件

低温运输，-70℃冻存。

操作方法（以下操作均按无菌条件的标准进行）---------------------------------------------------------

1 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化的细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。

一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

以下实验以100 μl感受态细胞为例。

2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。

3 将离心管置于42℃水浴中放置90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。

4 向每个离心管中加入500 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养1小时（160 - 220 转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5 将离心管内容物混匀，吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。

涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板。）

注意事项----------------------------------------------------------------------------------------------------------

1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。

2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。