骨髓细胞培养基

MarrowType™ Bone Marrow Karyotyping Medium

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【预期用途】

用于细胞增殖培养，不具备对细胞的选择、 诱导、分化功能，培养后的细胞用于体外诊断。（不用于微生物鉴别和药敏实验）。

【检验原理】

可以支持原代骨髓细胞短期培养，在中期阶段加入有丝分裂抑制剂，阻止有丝分裂，提供后续检测，如染色体核型分析。

【主要组成成分】

含有谷氨酰胺的RPMI-1640基础培养基、胎牛血清、抗生素

【适用范围】

骨髓体外增殖培养。

【储存条件及有效期】

培养基应贮存在-10~-20℃，有效期为2年，溶解后应存放于2-8℃，并于10天内使用。 存放及使用时注意避光。干冰运输。

【生产日期与失效日期】

详见产品标签。

【使用仪器】

显微镜、二氧化碳细胞培养箱、离心机。

【样本要求】

新鲜骨髓细胞

【使用方法】

1.  种骨髓：向装有10ml培养基的玻璃或塑料瓶中接种0.5ml的骨髓穿刺液，轻轻转动培养管使混合。

2.  培养：置37℃二氧化碳细胞培养箱培养72小时。

3.  终止培养：向每个培养管中加入秋水仙酰胺溶液，终浓度为0.1ug/ml，静置15-30分钟。

4.  收获细胞：将培养液转移至离心管中，离心力500g，离心5分钟。

5.  低渗处理：除去上清液，加入5-10ml 0.075M KCl溶液重新悬浮细胞，37℃孵化10-12分钟。

6.  离心：500g，离心5分钟，弃去上清液。

7.  固定：固定液为醋酸：甲醇=1:3，每个离心管中逐滴加入新鲜配制的、预冷的固定液5-10ml。置于4℃10分钟。

8.  再固定：重复步骤6和7。

9.  滴片：加入0.5-1ml固定液制成悬液。用吸管吸取细胞悬液，滴至干燥洁净的载玻片上，空气中晾干。

10.经吉姆萨染色处理后做染色体核型分析。

【参考值（参考范围）】

细胞倍增指数大于2

【检验结果的解释】

细胞培养时间、加入秋水仙酰胺的量以及低渗操作时间对结果影响较大，如发现制片所得的分裂相较少，需要对实验条件及样品进行确认。

【检验方法的局限性】

仅用于骨髓细胞培养

【产品性能指标】

1. 装量差异限度：±3%

2. 澄清度：澄清

3. PH值：7.2-7.6

4. 渗透压（mOsm/kg）：280-320

5. 无菌检测：无菌

6. 内毒素（EU/ml）：＜10

7. 细胞生长实验：细胞倍增指数大于2

【注意事项】

1. 本品仅用于体外诊断，不用于临床治疗，严禁内服，不能用嘴吸液。

2. 试剂包装如有破损或滴漏，严禁使用。

3. 操作过程应避免污染。

4. 操作人员在检验时应做好防护，预防血液病传播。

5. 操作人员万一与皮肤、粘膜接触，请立即用自来水冲洗。

6. 溶液应为澄清，如有沉淀物，严禁使用。

7. 禁止使用超出规定有效期的产品。

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仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。