SYBR Safe DNA 凝胶染料 10,000×

产品简介：

SYBR Safe DNA凝胶染料经特别开发降低致畸性，与传统且广泛使用的核酸染料-溴化乙锭（EB）相比，是一种更安全的DNA核酸染料，适用于琼脂糖或丙烯酰胺凝胶中的DNA染色。SYBR Safe的检测灵敏度与溴化乙锭相当。SYBR Safe染色后的DNA条带可用标准的紫外透射仪、蓝光可见光透射仪，或基于激光激发的扫描仪来观察。SYBR Safe也适用于凝胶中的RNA染色。与核酸结合后，SYBR Safe的最大激发波长为~280nm和~502nm，最大发射波长为~530nm。

本品为10,000×的SYBR Safe DNA核酸染料，操作同EB染色，兼容于EB染色的所有下游应用，包括：从凝胶中切取PCR产物，凝胶纯化，Gateway和Topo克隆，以及限制性内切酶克隆。

产品特点：

①降低接触高致突变的溴化乙锭（EB）和有害紫外线的风险

SYBR Safe DNA凝胶染料配方独特，与EB相比具明显更低的致突变性，使用更安全；另外，染色后的DNA条带可用蓝色可见光激发，减少暴露于紫外照射可能引起的暴露风险，特别在进行密集曝光实验（从凝胶中切出条带）中这一优势很有价值。

② 使用方便

SYBR Safe DNA凝胶染料以10,000×的浓缩液形式提供，操作方法同EB溶液。可按照1:10000的比例稀释到1×TAE或1×TBE，加入琼脂糖粉末加热溶解；亦可按1:10000的比例加入溶解但未凝固的琼脂糖溶液；亦可按1:3300的比例稀释到1×TAE或1×TBE，然后用其泡染电泳结束的凝胶。

保存条件: 

2-8°C避光保存，1年有效。

产品使用：

一、使用前准备工作

使用前将本品取出并回温至室温，使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液到管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存，小份染料能更快溶解。

二、染色方法

1．琼脂糖凝胶电泳染色（推荐方法）

1.1制胶：按常规操作，制备琼脂糖凝胶溶液，加入10,000×的SYBR Safe核酸染料，使其在凝胶中的终浓度为1×（比如：制备50ml的凝胶，加入染料5µl），轻轻摇匀，倒胶。

【注】：胶溶液温热（50-60℃）时，可加入SYBR Safe核酸染料；

【注】：剩余的胶液可以保存起来，之后重新加热熔化后再倒胶；倒好的预制胶（含SYBR Safe）可以保存在+4℃，后续待用。保存时间以实际使用效果为准。

1.2上样，按常规方法电泳。

1.3使用254nm激发的紫外凝胶成像系统或蓝色可见光激发的凝胶观察装置，观察染色凝胶。

2．泡染法

2.1按常规方法进行电泳。

2.2将10,000×的SYBR Safe核酸染料稀释~3300倍到pH 7.5-8.0的缓冲液（比如：TAE或TBE），制备成3×染色液。

2.3将凝胶小心放入合适的容器内，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶。

2.4室温避光震荡染色30min左右。

【注】：不需要进行脱色；

【注】：染色液或许能避光保存一周（最好是冷藏），但肯定是新鲜染色液获得的染色结果最好。

2.5使用254nm激发的紫外凝胶成像系统或蓝色可见光激发的凝胶观察装置，观察染色凝胶。

【注】：关于SYBR Safe染色凝胶的观察，合适的滤光片信息见附录I。

【注】：SYBR Safe染色的凝胶如果后续需切胶，且用于连接反应，建议用蓝光可将光激发源对凝胶进行成像（比如：Safe Imager^TM 2.0蓝光投射仪），避免使用紫外光源。某些情况下，紫外光源照射SYBR Safe会引起降低的克隆效率。

注意事项：

1.      独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Safe在凝胶染色浓度下无诱变性。但是，必须警告用户注意，目前尚无关于SYBR Safe对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合，应当被看作潜在诱变剂，使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心，因DMSO能促进有机分子进入组织。染料的废弃处理应当符合当地的规定。

2.      SYBR Safe具有良好的热稳定性，可在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃、震荡或翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将SYBR Safe到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶；SYBR Safe兼容所有常用的电泳缓冲液。

3.      如果条带总是弥散或分离不理想，请用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依然存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度，选择更长的凝胶，延长凝胶时间以保证边缘清晰。

4.      SYBR Safe对玻璃器皿和非聚丙烯材料具有一定的亲和力，建议在稀释、贮存、染色等过程中使用聚丙烯类容器。

5.      SYBR Safe不适合对较低分子量（100-200bp）的核酸进行染色。

6.      对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

7.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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常见问题：

1、SYBR染料的pH范围是多少？

回答：SYBR染料仅在很窄的pH范围内有效，约为pH 7-8。超出此范围，荧光信号将迅速消失。

2、SYBR Safe DNA凝胶染料的检测下限是多少？

回答：SYBR Safe DNA凝胶染料的灵敏度与溴化乙锭（EB）类似。小型凝胶中通过300 nm透射仪观察200 bp以上的片段，可检测大约500 pg/条带。

3、SYBR Safe DNA凝胶染料可以重复使用？

回答：建议不要重复使用SYBR Safe DNA凝胶染料，其会显著降低检测灵敏度。

4、SYBR Safe DNA凝胶染料可以用微波加热？

回答：SYBR Safe DNA凝胶染料可短暂进行微波加热，性能不会损失。如果进行反复或长时间微波加热，暂不知道会产生什么样的结果。

5、SYBR Safe DNA凝胶染料是否需要在暗室中使用？

回答：建议在存储和凝胶染色过程中注意避光。但SYBR Safe DNA染料本身足够稳定，能够承受＞30min的紫外照射。实际上，需要数小时的持续紫外光或明亮的室内光照才会导致信号出现明显损失。

6、SYBR Safe DNA凝胶染料是否会影响分子克隆效率？

回答：内部实验发现，当从凝胶中纯化DNA以供下游实验使用，使用SYBR Safe DNA凝胶染料和蓝光透射，相比使用EB和UV，具有明显优势。

7、是否可通过乙醇沉淀法去除染料？

回答：SYBR Safe DNA凝胶染料可通过乙醇沉淀法轻松地从核酸中去除。

8、电泳时，SYBR Safe DNA凝胶染料朝哪个方向迁移？

回答：与溴化乙锭（EB）相似，SYBR Safe DNA凝胶染料与DNA的迁移方向相反。由于只有凝胶的最底部染料浓度会在电泳过程中降低，所以使用SYBR Safe DNA凝胶染料制备的凝胶没有实际影响。在电泳结束后用SYBR Safe DNA凝胶染料染胶，可部分抵消这种作用。染料溶液不应该加入到电泳缓冲液中，因为这可能会导致染料在电极上分解，并将有毒的挥发性化合物释放到空气中。

9、使用SYBR Safe DNA凝胶染料染色，为什么有时候会在凝胶内看到斑点？

回答：很多衣服上的增白剂以及某些真菌和细菌，和SYBR Safe DNA凝胶染料会发出同样波长的荧光。这些位于凝胶表面或凝胶内的污染物可能会产生斑点。

10、SYBR Safe DNA凝胶染料的pH范围是多少？

回答：SYBR染料仅在很窄的pH范围有效，约pH 7-8，超出此范围，荧光信号将迅速消失。

11、用SYBR Safe DNA凝胶染料进行的染色，还可使用哪些其他激发波长进行观察？

回答：SYBR Safe DNA凝胶染料有两个主要的激发峰：紫外区的280nm和可见光区的502nm。因此，254 nm或300 nm紫外激发光以及488 nm激光、470 nm LED和广泛的蓝色光源（如Safe Imager蓝光透射仪）都能够有效激发。最大激发波长为502nm；因此，Safe Imager蓝光透射仪是激发SYBR Safe DNA凝胶染料的最佳选择。

12、使用溴化乙锭滤光片及其相机设置能否看到SYBR Safe DNA凝胶染料？

回答：SYBR Safe DNA凝胶染料的最大发射波长为530 nm。因此一些溴化乙锭滤光片可以透过所有500 nm以上的光。这些滤光片（通常为黄色）及其相关相机设置适用于SYBR Safe DNA凝胶染料，通常只需对曝光或补光稍作调整。其他溴化乙锭滤光片（通常为红色）只能透过600 nm或以上的光；这些滤光片及其相关相机设置不适用于SYBR Safe DNA凝胶染料。