SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO, 电泳级) 

SYBR Green I 核酸凝胶染料 10,000×

产品简介：

SYBR Green I，是目前检测琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA最灵敏的染料之一，最低检出限为20pg DNA（254nm紫外发射光），60pg DNA（300nm透射光）；还可用于寡核苷酸检测（1-2ng，300nm透射光），比溴化乙锭EB的灵敏度高50-100倍。

SYBR Green I检测凝胶中核酸的非凡灵敏度归因其独特的染料特性：①SYBR Green I具有超强的DNA结合力，与DNA结合后荧光显著增强—至少比EB高出一个数量级；②DNA/SYBR Green I复合物的荧光量子产率（~0.8）比DNA/EB（~0.15）高5倍多；③SYBR Green I在琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中迅速渗透，在缺乏DNA时背景荧光可忽略，让染色步骤快速，且成像之前无需脱色。

SYBR Green I因与DNA结合能力强，既能在电泳前（预染），也能在电泳后（后染）对DNA进行染色。还可对毛细管电泳分离的DNA进行染色。SYBR Green I与DNA的结合不会抑制多种常见的限制性内切酶活性，包括Hind III和EcoR I，可直接进行消化或连接。用于琼脂糖凝胶电泳检测DNA后，还可直接将DNA转移到膜上，进行后续的核酸印迹杂交分析。

本品为溶于DMSO的10,000×的SYBR Green I核酸染料，电泳级。

保存条件: 

-20°C避光干燥保存，1年有效。

产品使用：

一、使用前准备工作

使用前将本品取出并回温至室温，使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液到管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存，小份染料能更快溶解。

二、染色方法

1．电泳后的DNA染色（后染）

1）在琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。

【注】：TBE和TAE缓冲液均适合于SYBR Green I染色。

2）用TE、TAE或TBE缓冲液将SYBR Green I储存液进行1:10,000倍稀释。

【注】：

①SYBR Green I染色对pH敏感，为获得最佳的灵敏度，应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5- 8.0之间（pH8.0更佳）。

②用水配制的染色液不如用缓冲液配制的稳定，为确保最大的染色灵敏度，必须在24h内使用。此外，用pH低于7.5或高于8.0的缓冲液配制的染色液也不太稳定，染色效率有所下降。

3）染液要充分覆盖凝胶，室温轻摇孵育10-40min。

【注】：

①推荐用塑料而不是玻璃容器来储存染色液，因染料会吸附到玻璃表面。

②染色过程避光进行，建议在容器上加盖铝箔或置于暗处。

③凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同，染色时间将有所不同。

④无需脱色。

⑤染色液可置暗处（最好是冷藏）放置1周或更久，重复使用最多4次。

2．电泳前的DNA染色（预染）

1）配制成SYBR Green I预制凝胶

临灌胶前将SYBR Green I储存液按照1:10,000倍稀释到凝胶溶液中，预制成含有SYBR Green I染料的琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶。电泳结束后即可在适合的凝胶成像仪下检测。【预染推荐用此法】

预制的SYBR Green I凝胶的DNA检测下限（大约为30-40pg/条带），可能略高于电泳后染色（＜20pg/条带）。此外，在SYBR Green I凝胶中的DNA片段迁移率明显比无染料凝胶中的相同片段慢。

2）作为DNA模板预染标记

一般而言，DNA在电泳前与染料工作液（1:10,000倍稀释）至少孵育15min。

三、凝胶成像（紫外或蓝光透射仪或紫外顶置光源直射）

可在紫外或蓝光光源下轻松观察到用SYBR Green I染色的DNA。

四、从dsDNA中去除SYBR Green I

使用简单的乙醇沉淀能从dsDNA中去除99%以上的SYBR Green I染料。

将SYBR Green I染色的DNA移至100mM NaCl，加入2.5倍体积的无水或95%的乙醇。在冰上孵育约20min，4℃离心至少10min。去除乙醇，并用70%乙醇洗涤沉淀。让乙醇挥发，并用TE重悬双链DNA。

注意事项：

1.      独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I的致突变性明显比EB要低很多。但是，必须警告用户注意，目前尚无关于SYBR Green I对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合，应当被看作潜在诱变剂，使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心，因DMSO能促进有机分子进入组织。染料的废弃处理应当符合当地的规定。

2.      SYBR Green I对dsDNA的检测灵敏度非常高（20pg，254nm紫外发射光），但对ssDNA和RNA的灵敏度稍低（100-300pg，254nm紫外发射光），使之成为复杂溶液中检测dsDNA的理想选择。尤其是复杂溶液中的ssDNA和RNA可能会掩盖结果的时候，如凋亡特有的连续梯度条带apoptosis ladders。

3.      SYBR Green I的最大激发波长为497nm，但在～290nm和～380nm处有二级激发峰。与DNA结合的SYBR Green I的荧光发射集中在520nm。这些光谱特性让SYBR Green I适用于多种凝胶检测仪，从紫外反射（上紫外）和透射仪（下紫外）到氩离子激光器和水银灯激发的凝胶扫描仪。

4.      预染色方法，电泳时间不要超过2h，否则SYBR Green I会从DNA上脱离出来，产生弥散状条带。

5.      紫外照射透视下，与dsDNA结合的SYBR Green I呈绿色荧光。如果胶中含ssDNA，则荧光颜色为橘黄色而不是绿色。

6.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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