木质素( Lignin)含量测定试剂盒（乙酰化法） 分光法

产品简介：

木质素是一种含有羟基和甲氧基的高分子芳香族化合物，是苯丙烷的衍生物，作为植物 的化学成分与纤维素及半纤维素共同形成植物体骨架，大大提高了细胞壁的机械强度，为植 物提供支持，适应环境，抗虫病害和抗倒伏的生理功能，同时，在木质素合成过程中产生的一些前体物质酚类和自由基可以破坏原菌相关酶类的生物活性与细胞膜的通透性，从而使植 物有一定的自我防御能力。

本试剂盒采用乙酰化法，使木质素中的酚羟基发生乙酰化，其在280nm处有特征吸收峰，280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。

保存条件: 

2-8℃保存，6个月有效。

产品组成：

产品使用：

建议正式实验前，选取2个样本做预测定，了解实验样品情况，熟悉流程，避免样本和试剂浪费。

一、样本准备

1. 取适量组织样本烘干并磨碎，过40目筛备用；

2. 取10mg 过筛的粉末组织，加1.5mL的80%乙醇，涡旋振荡混匀，50℃水浴20min（间隔3min晃动几下）；

3. 取出流水冷却后，12000rpm，25℃10min，弃上清，留沉淀（尽量保留沉淀）；

4. 向沉淀中加入1mL的80%乙醇震荡混匀2min，50℃水浴20min（间隔3min晃动几下）；

5. 取出流水冷却后，12000rpm，25℃10min，弃上清，留沉淀（尽量保留沉淀），95℃烘干沉淀，待用。

二、样品测定

1. 紫外分光光度计预热30min，设置温度在25℃，调节波长到280nm，蒸馏水调零。

2. 在上述样本制备步骤最后得到的离心管(95℃烘干的沉淀)管中加入：

【注】：1.若是木本植物也可考虑添加高氯酸进行乙酰化，即样本制备得到的沉淀+750μL试剂一+30μL高氯酸（也需缓慢加入，谨慎操作），充分混匀，70℃水浴30min（整个操作过程同上），加300μL试剂二和420μL 乙酸，总体积仍为1.5mL，后续操作过程同上。

2.若A测定管大于1.8，在最后一步用比色皿检测时：取80μL澄清上清液+720μL乙酸至1mL石英比色皿（光径1cm）中（空白管也一样操作），则上清液相当于稀释了10 倍，则计算公式中的10替代4 参与计算。

三、结果计算

1. 标准曲线方程：y =17.853x -0.0029；x 为标准品浓度（mg/mL），y为ΔA。

2. 按样本重量计算：

木质素(mg/g重量)=[(ΔA+0 .0029)÷17.853]×V1÷W×4=0.084×(ΔA+0 .0029)÷W×4

V1----定容后总体积，1.5mL           

W----样本重量，10mg=10×10^-3g

4---至比色皿中检测时上清液稀释倍数

注意事项：

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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