NBT染色液(1mg/mL,pH7.8)

产品简介：

植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧(ROS)，ROS 活性非常大且极其不稳定，因此ROS 的检测通常因其最终产物而定。超氧阴离子是活性氧的一种，属于一种含氧自由基，能将NBT（氮蓝四唑）还原成不溶于水的蓝色甲瓒化合物，从而定位组织中的超氧阴离子。

NBT染色液(1 mg/ml,pH7.8)由NBT和磷酸盐组成，用于植物活组织中的超氧阴离子染色。一般应用于较嫩的根尖、叶片等的整体染色，染色后有超氧阴离子聚集的部位呈蓝色至深蓝色。

保存条件: 

2-8℃避光保存，1年有效。

产品组成：

自备材料：

1.            新鲜的植物叶片或根、自来水、蒸馏水、95%乙醇

2.            超声波、磁力搅拌器、电子天平、量筒、滤纸、照相机

产品使用：（仅供参考）

1.      试剂准备：将100mg NBT 加入到100ml 磷酸缓冲液(pH 7.8)中充分溶解，即得NBT 染色工作液，4℃避光保存，一月内有效。注：如果较难溶解，可通过超声、磁力搅拌等方法促溶。

2.      样本准备：采集经胁迫（例如重金属）的采集植物幼苗或根尖，自来水稍洗净，置于滤纸上吸干多余水分。

3.      染色：将植物幼苗或根尖浸入NBT 染色工作液中，常温避光浸染2 ~6 h，至阳性部位出现深蓝色，其余部位为淡蓝色或近无色或呈植物本身的颜色即可。（根据植物幼嫩程度。显色程度调整染色时间）

4.      脱色：用镊子将植物幼苗或者叶片小心取出，浸入蒸馏水中来回漂洗3 ~5 次，置于滤纸上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃处理3 ~16 h，目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素或者淡蓝色背景，处理期间可多次更换新鲜的95%乙醇。

5.      观察：用镊子取出植株幼苗或者叶片，浸入蒸馏水中来回漂洗3 ~5 次，置于滤纸上吸干多余水分后，拍照。（吸干水分后可将样本转入NBT 染色样本保存液中浸泡30 min，样本可置于该保存液中常温保存一周。）

注意事项：

1.      NBT 染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一月内使用。存放时间过久，会影响显色。

2.      因任何外在因素都可能刺激植物应激产生超氧阴离子，因此植物样本需要新鲜采集，并尽快完成染色。建议做阴性及阳性空白对照组。

3.      样本染色完成后尽快拍照保存结果。

4.      染色和脱色步骤也可参考如下建议操作：组织放入染液中，抽真空，-0.1 MPa 保持负压20 ~30min，再于室温下静置染色60min，弃染色液；加入95%乙醇，于70 ~80℃水浴锅脱色，每隔10min 换一次95%乙醇，待样品绿色全部褪去后可停止脱色。。

5.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！

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