支原体qPCR检测试剂盒
MycoEZ, Mycoplasma qPCR Kit MycoEZ
产品编号 | 产品名称 | 包装规格 | 目录价 |
M5010-0025 | MycoEZ 支原体qPCR检测试剂盒 | 25rxn | 2000 |
【产品介绍】
MycoEZTM支原体检测试剂盒可对细胞培养物进行快速、高灵敏的支原体污染检测,可以检测出的支原体种类如下:
Mycoplasma Group | Strains | |||
Mycoplasma spp. | M. arginini | 精氨酸支原体 | M. hyorhinis | 猪鼻支原体 |
M. arthritidis | 关节炎分支原体 | M. orale | 口腔支原体 | |
M. bovis | 牛支原体 | M. pirum | 梨支原体 | |
M. capricolum | 山羊支原体 | M. pneumoniae | 肺炎支原体 | |
M. fermentans | 发酵支原体 | M. pulmonis | 肺支原体 | |
M. hominis | 人型支原体 | M. salivarium | 唾液支原体 | |
M. hyopneumoniae | 猪肺炎支原体 | M. yeatsii | 酵母支原体 | |
支原体检测试剂盒包含以下组分:
Component | M5010-0025 (25 preps) |
MycoEZ™ Lysis Buffer A (Blue) | 200 μL |
MycoEZ™ 2X Probe Fast qPCR Master Mix (Brown) | 125 μL |
MycoEZ™ Positive Control 1000 copies/μL (Orange) | 18 μL |
MycoEZ™ Negative Control (Yellow) | 18 μL |
MycoEZ™ 20X TaqMan Assay Dye (Green) FAM labeled (Ext.~490 nm / Emi.~520 nm) | 12.5 μL |
Nuclease-Free Water (Translucent) | 1 mL |
【使用方法】
(A)样本准备
1. 取 50 μL细胞培养液等样本至0.5 mL离心管内,放入离心机,以2000 ×g离心3 min。
2. 用移液器小心地弃掉上清(约50 μL)( 可能沉淀不可见)。
3. 取8 μL MycoEZTM Lysis Buffer A 到 0.5 mL 离心管内,吹打均匀。
4. 用移液枪上下吹打,使沉淀溶解,准备qPCR反应。
(B)qPCR 反应液准备
qPCR 反应体系为 10μL,各试剂如下表,加入PCR管中:
Component | Volume for one 10 μL reaction | ||
Test (μL) | Positive Control (μL) | Negative Control (μL) | |
Nuclease-Free Water | 2.5 | 2.5 | 2.5 |
MycoEZ™ 20X TaqMan Assay Dye | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
MycoEZ™ 2X Probe Fast qPCR Master Mix | 5 | 5 | 5 |
Digested lysate | 2 | 0 | 0 |
MycoEZ™ Positive Control | 0 | 2 | 0 |
MycoEZ™ Negative Control | 0 | 0 | 2 |
Total volume (μL) | 10 | 10 | 10 |
(C)qPCR 实验
Step | Time | Temp. | Data Collection | Note |
Hold | 1 min | 95°C | ★ Polymerase Activation | |
Cycle (35) | 3 sec | 95°C | ■ | Denature / Anneal / Extend |
30 sec | 60°C |
★ 聚合酶激活需要超过1分钟 ■FAM标记 (Ext.~490 nm / Emi.~520 nm)
(D) 分析数据
1. 手动设置阈值为0.2。
2. 阴性对照无荧光信号,阳性对照(2000 copies)=Ct 28±1。
3. 确定每个样本Ct值(计算样本支原体拷贝数)。
4. 支原体拷贝数计算器网站链接:http://www.xpbiomed.com/newsinfo/7178381.html
【储存条件及保质期】
该试剂盒的所有组分需在-20℃环境中保存,有效期36个月。干冰运输。
仅用于科研使用,不能用于临床诊断和治疗。