RIPA裂解液（强,含抑制剂）

产品介绍 

RIPA 裂解液（强）对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用，是一种经典的细胞组织快速裂解液，可以从培养的哺乳动物细胞（包括铺板细胞和团状悬浮细胞）中高效裂解并提取蛋白。提取的蛋白可用于常规的PAGE、Western blot、IP等。 

产品优势 

1) 便利，无需自行配置溶液，即用型解决方案。 

2) 灵活，可用于常规的PAGE、Western blot、IP、磷酸化蛋白的Western blot等。 

3) 通用，对动物细胞膜、细胞浆、细胞核成分均有较强的裂解作用 。 

试剂组分

使用方法 

1 贴壁细胞: 

1) 吸弃培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。 

2) 按照6孔板每孔加入150-250 µL裂解液的比例加入RIPA裂解液（强），1.5-2.5µL100×PMSF。用枪吹打数下，使RIPA裂解液（强）和细胞 充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2 sec后，细胞就会被裂解。 

2 悬浮细胞： 

1) 800g 4℃离心 5 分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（106 cells=~20µL, 107 cells =~100µL ）。 

2) 每50-100µL加入250-500µLRIPA裂解液（强），1.5-2.5µL100×PMSF，冰浴放置10min，并每隔5min在漩涡混合仪上振荡30sec ；

注意： 如果所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5min，迅速冰浴5min，再进行下一步骤。 

3) 12,000g 4℃离心 10min，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。 

3 组织样品： 

1) 把组织剪切成细小的碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS。 

2) 按照每20mg组织加入150-250µL裂解液的比例加入RIPA裂解液（强），1.5-2.5µL100×PMSF。如果裂解不充分可以适当增加RIPA裂解液（强）的体积，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。 

3) 用充分匀浆样品，也可以液氮研磨组织样品，研磨充分后加入RIPA裂解液（强）进行裂解。 

4) 充分裂解后，12,000g 4℃离心10min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western blot和IP等操作。

储存温度 

保存温度：-20℃，1年。频繁使用可短期保存于4℃。

产品应用 

1) 本产品适用于普通的Western、IP，该裂解液裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。 

2) 也适合用于磷酸化蛋白的Western blot检测。

注意事项 

1) 裂解样品的所有步骤都需要在冰上或4℃进行。 

2) 选择合适的裂解液也需要通过一些预实验来摸索符合实验的最佳条件。 

3) 本产品含有高浓度的去污剂，不适合使用Bradford法测定蛋白浓度，请使用BCA法（BK0001-01、BK0001-02）。