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国产vs进口，荧光定量PCR预混液真实测评

栏目：技术支持
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2款国际大牌，3款国内品牌，共5款探针法荧光定量PCR预混液，扩增效率与特异性真实测评。


实时荧光定量PCR（real-time qPCR）实验在分子生物学研究中越来越普遍。现在常用两种荧光定量方法：SYBR Green I嵌合荧光染料法，和TaqMan探针法。染料法成本较低，使用方便，是最常用的荧光定量方法；探针法成本较高，但是定量结果更准确。











挑选一款质量好的扩增产品对于实验结果有至关重要的作用。新手们对于如何判断一款qPCR预混液的好坏有点迷茫，常常会出现一个误区：扩增效率越高越好。






 






为什么不是效率越高越好？产物的特异性怎么判断？国产品牌和进口品牌的差距在哪里？通过下面的实验就可以看出来。

测评开始

5种品牌的TaqMan探针法荧光定量PCR预混液，同时用相同的模板DNA和引物进行扩增。扩增曲线如下：
 





















 
可以看出扩增曲线都正常，除了国产品牌C的Ct值较大，即扩增效率较低外，其余4个品牌的Ct值均接近。但是它们真实地反映了目标产物的实时扩增情况吗？
 






我们对以上qPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据产物大小可以直观地判断其特异性：
 
 
品牌A和品牌D的产物存在明显的非特异性扩增；品牌C的产物大小不正确，完全是非特异性扩增；东盛生物（一款探针法和两款染料法）和品牌B的产物是特异的。
 






通过对比我们发现，扩增效率不是越高越好，产物特异才是最重要的！






 
首次使用的引物，不论是进行染料法定量的，还是探针法定量的，都建议通过DNA电泳来直观判断其特异性。当然，染料法定量的特异性也可以借助熔解曲线来判断。
 
以上只是我们对比测评的一组结果，综合多次、多品牌、多类型的对比结果，从整体水平来看，进口大牌的qPCR预混液比国产品牌质量更可靠，但也不是全部都表现很好。







东盛生物qPCR Mix不断优化升级，与众多国际品牌对比均表现突出。











东盛生物荧光定量PCR预混液核心成分为类抗体技术修饰的热启动酶，完美平衡了特异性与扩增效率。






特异性过高会抑制扩增效率，扩增效率过高会降低特异性，因此保持特异性和扩增效率在一个平衡的位置是qPCR Mix的技术难题。






东盛生物拥有超过十年的PCR技术研发经验，经过反复尝试，不断优化，得到了兼顾特异性与扩增效率的qPCR Mix。











部分客户发表文献如下：
Fengxia Tu, Qiongyi Pang, et, al. Angiogenic effects of apigenin on endothelial cells after hypoxia-reoxygenation via the caveolin-1 pathway. International Journal of Molecular Medicine. 2017; 40 (6): 1639-1648. DOI: 10.3892/ijmm.2017.3159.
Yaping Nie, Hu Chen, et, al. Palmdelphin promotes myoblast differentiation and muscle regeneration. Scientific Reports. 2017; 7 (1): 41608. DOI: 10.1038/srep41608.

 
广州东盛生物科技有限公司（Dongsheng Biotech Co., Ltd）成立于2005年1月，是一家专注于研发、生产、销售优质生命科学产品的高新技术企业。

公司产品线以PCR技术为核心，聚焦于普通PCR、qPCR、多重PCR，DNA电泳以及核酸纯化等分子生物学技术。产品主要应用于基础生命科学研究。

产品远销亚洲、欧洲和美洲等二十多个国家和地区，凭借优秀的产品质量和专业的技术支持，我们的产品获得了极佳的国际口碑。



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