Cell-tracker CM-DiI/活细胞示踪剂/ DiI改良探针/红色荧光

CM-DiI基本描述：

CM-DiI（活细胞的多代示踪、固定细胞长期示踪）

CellTracker CM-DiI为DiI的衍生物，在DiI中加入了具有中度巯基反应特性的氯甲基取代物，后者能与细胞内含巯基的肽和蛋白结合，使得CM-DiI能够抵抗醛类的固定作用。CM-DiI在细胞固定、破膜及石蜡包埋的整个过程中均能很好的保留在细胞内，因此，与传统细胞膜探针DiI相比较，更适于固定后标本的长期示踪。其红色/绿色的光谱特征，使其可与绿色探针或者绿色荧光蛋白如GFP一起用于双标实验。

 CM-DiI基本特性：

1） CAS NO：180854-97-1

2） 化学名：3H-Indolium, 5-[[[4-(chloromethyl)benzoyl]amino]methyl]-2-[3-(1,3-dihydro-3,3-dimethyl-1- octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1-propenyl]-3,3-dimethyl

-1-octadecyl-, chloride

3） 分子式：C68H105Cl2N3O

4） 分子量：1051.5g/mol

5）  纯度：≥95%

6）  外观：红色固体

7）  Ex/Em：553/570 nm（甲醇）

8）  推荐滤光器：Omega-XF32, Chroma-31002

9）  溶解性：溶于DMSO，乙醇，DMF

10）化学结构图： 

CellTracker CM-DiI具以下特征：

a）使用方便，只需吸掉培养液，加入探针，30min孵育，显微成像；

b）荧光信号至少可持续72h以上（一般3-6代），染料只传到子代细胞，不会染上邻近细胞。

c）毒性很低，不会影响细胞增殖和活力。

总而言之，CellTracker CM-DiI具有良好的示踪特征，对细胞无毒，稳定长效，染料很好保留在细胞内，生理pH荧光信号强。

研究证实，CM-DiI标记后荧光在胞内表达稳定，阳性标记率达98%以上，标记细胞形态良好，能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况；或将标记的细胞注入体内，可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。

CM-DiI（改良探针）与DiI（传统探针）在透化和非透化处理样本的效果比较：【来自文献Staffend NA, et al. DiOlistic labeling of neurons in tissue slices: a qualitative and quantitative analysis of methodological variations.Front Neuroanat. 2011 Mar 1;5:14.】

1、未透化组织DiI&CM-DiI标记完整性的比较

结果显示【见图1&图2】：两种荧光探针（DiI和CM-DiI）标记组织的全细胞检测显示，不管是即刻观察，还是2周后观察，染料完整性和图片质量都保持完整。对于树突状片段的结果染色结果一致。另外，通过分析树突段的突棘密度来调查不同时间周期下染色稳定性和完整性。对于DiI标记的树突段，不会时间段染色几乎无差异。然而，CM-DiI标记的树突段，突棘密度封片2周后明显增强。

图1（左）. 非透化荧光染色组织的全细胞检测。A）DiI标记组织封片后马上检测；B）DiI标记组织封片2周后荧光检测；C）CM-DiI标记组织封片后马上检测；D）CM-DiI标记组织封片2周后荧光检测；

图2（右）. 非透化荧光染色组织的树突片段检测。A）DiI标记组织封片后马上检测；B）DiI标记组织封片2周后荧光检测；C）CM-DiI标记组织封片后马上检测；D）CM-DiI标记组织封片2周后荧光检测；

2、透化组织DiI&CM-DiI标记完整性的比较

结果显示【见图3&图4】：两种荧光探针（DiI和CM-DiI）标记组织封片后即刻检测，不论是全细胞还是树突段，结果都无明显差异；两种荧光探针（DiI和CM-DiI）标记组织封片2周后检测，不论是全细胞还是树突段，CM-DiI标记的稳定性在荧光信号、光淬灭和最终图片质量上都强于DiI。

不管是即刻观察，还是2周后观察，染料完整性和图片质量都保持完整。对于树突状片段的结果染色结果一致。另外，通过分析树突段的突棘密度来调查不同时间周期下染色稳定性和完整性。对于DiI标记的树突段，不会时间段染色几乎无差异。然而，CM-DiI标记的树突段，突棘密度封片2周后明显增强。

图3（左）. 透化荧光染色组织的全细胞检测。A）DiI标记组织封片后马上检测；B）DiI标记组织封片2周后荧光检测；C）CM-DiI标记组织封片后马上检测；D）CM-DiI标记组织封片2周后荧光检测；

图4（右）. 透化荧光染色组织的树突片段检测。A）DiI标记组织封片后马上检测；B）DiI标记组织封片2周后荧光检测；C）CM-DiI标记组织封片后马上检测；D）CM-DiI标记组织封片2周后荧光检测；

温馨提示：对于不经透化处理的样本，只需用传统的细胞膜荧光探针如DiI染色即可。对于后续需透化处理的样本，推荐用改良探针如CM-DiI（货号：NBS5237-50ug）进行染色。

细胞膜探针光谱和检测滤片：

应用文献：

1.  Hemmrich Ket al,Applicability of the dyes CFSE, CM-DiI and PKH26 for tracking of human preadipocytes to evaluate adipose tissue engineering.Cells Tissues Organs. 2006; 184(3-4):117-27.

2.  Andrade W, et al, The use of the lipophilic fluorochrome CM-DiI for tracking the migration of lymphocytes.J Immunol Methods. 1996 Aug 14;194(2):181-9.

3.  Schatteman GC, et al,Blood-derived angioblasts accelerate blood-flow restoration in diabetic mice.J Clin Invest. 2000 Aug; 106(4):571-8.

4.  Foley-Comer AJ, et al, Evidence for incorporation of free-floating mesothelial cells as a mechanism of serosal healing.J Cell Sci. 2002 Apr 1;115(Pt 7):1383-9.

5.  Djouad F, et al,Immunosuppressive effect of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals.Blood. 2003 Nov 15;102(10):3837-44. Epub 2003 Jul 24.

6.  Hosie KA, et al,Chronic excitotoxin-induced axon degeneration in a compartmented neuronal culture model.ASN Neuro. 2012 Feb 23;4(1). pii: e00076. doi: 10.1042/AN20110031.

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注意事项：

1.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。