点击这里给我发消息 业务咨询:021-61241614 18616364863
活 体 成 像 试 剂— — 生物化学发光检测法(荧光素酶)
发表日期:2012-5-30

 

D-Luciferin and Coelenterazine
— — 生物化学发光检测法(荧光素酶)
背 景:
活体成像技术(optical in vivo imaging)目前主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术,生物发光法是基于荧光素酶能催化底物(D-LuciferinCoelenterazine)化学发光的原理,将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内,与后期注射入体内的底物发生反应,利用光学系统检测光强度,间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域,最常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立,并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。
原 理:
常见的荧光素酶有两种,分别是萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,编码基因是luc)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase,编码基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它们共同的作用原理是在ATP和荧光素酶的催化作用下,底物被氧化发光(不同底物光的颜色和波长不同),当底物过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。
产 品:
化学发光底物1D-Luciferin
美国Goldbio公司提供几种常用类型的D-Luciferin,每批试剂都经过严格的质量验证(经9次独立的HPLCFTIR标准法监测)和发光效率检测,确保客户每次试验的高重复性和成功性。所有产品都可用于体内成像分析和体外化学发光检测实验。GoldbioD-Luciferin是合成的萤火虫荧光素,结构与promega公司提供的甲虫荧光素一致,是水溶性的萤火虫荧光素酶底物。
1D-Luciferin, Sodium Salt/ D荧光素钠盐
分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O 分子量:320.32 g/mol 纯度:高级纯(99.7%
用:1)体外化学发光分析(in vitro);2)活体成像实验(in vivo); 3)高灵敏度ATP分析;
骤:
Protocol 1 In Vitro Bioluminescent Assays / 体外生物发光检测
133.3 mL蒸馏水溶解1.0 g D-荧光素钠盐,配制成100 mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。混匀后立即使用或分装后-20冻存。
2用组织培养基1200稀释储存液,配置工作液(终浓度150μg/mL)
3去除培养细胞的培养基。
4待图像分析前,向细胞内添加荧光素工作液,然后进行图像分析。
Protocol 2In vivo analysis / 活体成像分析
1用无菌的PBSw/o Mg2+Ca2+)配制D-荧光素钠盐工作液(15mg/mL)0.2 um滤膜过滤除菌。一旦使用,保持冰冷且避光。
2)注射量取决于注射方式,具体如下:

注射方式
剂量
静脉注射25-27 gauge针头)
10 uL/g体重浓度,加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液
腹腔注射(25-27 gauge针头)
10 uL/g体重浓度,加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液
肌肉注射(27 gauge针头)
50 uL,浓度为1–2 mg/mL荧光素工作液
鼻内注射(pipette
50 uL,浓度为3 mg/mL荧光素工作液

3)注射入体内5-10分钟后,进行成像分析。
产品报价:

货号
规格
单价
D-Luciferin, Sodium Salt
100MG
1380
D-Luciferin, Sodium Salt
1G
4880
D-Luciferin, Sodium Salt
LUCNA-1G
5G
21900

2D-Luciferin, Potassium Salt/D-荧光素钾盐;
分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O 分子量:320.32 g/mol 纯度:高级纯(99.7%
应用:1)活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析;
2)广泛用于报告基因分析,免疫分析和ATP荧光卫生监测分析;
Protocol 1In Vitro Bioluminescent Assays / 体外生物发光检测
1配制成100 mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。混匀后立即使用或分装后-20冻存。
2用预热好的组织培养基1200稀释储存液,配制工作液(终浓度150μg/mL)
3去除培养细胞的培养基直至无残留。
4图像分析前立即向细胞内添加荧光素工作液,然后进行图像分析(或者细胞放在37短时间孵育后检测可增强信号)。
Protocol 2In vivo analysis in mice / 小鼠活体成像分析
1用无菌的DPBSw/o Mg2+Ca2+)配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/mL)0.2 um滤膜过滤除菌。一旦使用,保持冰冷且避光。
210 μL/g体重的浓度向每支小鼠注射相应量的15mg/mL荧光素溶液;
3腹腔注射10-15 min后进行成像分析。(对每只动物模型做荧光素动力学研究以确定峰值信号获取时间)
 
产品报价:
 
 

货号
规格
单价
D-Luciferin, Potassium Sal
LUCK-100
100MG
1380
D-Luciferin, Potassium Sal
LUCK-500
500MG
2990
D-Luciferin, Potassium Sal
LUCK-1G
1G
4880

3D-Luciferin Firefly, free acid/D-萤火虫荧光素
分子式:C11H8N2O3S2 分子量:280.330 g/mol 外观:白色至浅黄色粉末
溶解:0.25%浓度溶解于甲醇,形成近乎无色至浅黄色的清夜
保存:-15°C 避光
应用:1)活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析;
2广泛用于报告基因分析,免疫分析和ATP荧光卫生监测分析;
产品报价:

货号
规格
单价
L-123-100
100MG
1380
D-Luciferin Firefly, free acid
L-123-500
500MG
2990
D-Luciferin Firefly, free acid
L-123-1G
1G
4880

使用GBT公司荧光素(Luciferin)发表的文献:
1. Barth et al. Molecular Therapy. 2008, 16. 957-964.
2. Mahller et al. Cancer Research. 2008, 68 (4). 1170-1179.
3. Marques et al. Journal of Neurovirology. 2008, 14 (3). 229-238.
4. Stish et al. J. Neurooncol. 2008, 61 (1). 51-61.
5. Zhang et al. Cancer Research. 2007, 67. 9389-9397. 6. Baia, G. et al, Brain Pathology, 2007, 18 (2), 172-179.
7. Barth, A. et al, Molecular Therapy, 2008, 16 (5), 957-964.
8. Su Y. et al. Clinical and Experimental Metastasis, 2009
 
化学发光底物2Coelenterazine
美国Goldbio提供三种coelenterazine类似物分别是CoelenterazineCoelenterazine hCoelenterazine 400a。虽然三种都可用于相同实验,但是得到的结果有差异。
Coelenterazine普遍认为是天然的腔肠荧光素,是海肾荧光素酶(Rluc)的作用底物,具有许多用途。可用于检测活细胞中钙离子浓度,基因报告分析,BRET生物发光共振能量转移)研究,ELISAHTS,组织或细胞中超氧阴离子和过亚硝酸盐的化学发光检测。
Coelenterazine h: Renilla荧光素酶或Gaussia荧光素酶使用具有一定的局限性。体外研究中比其他类似物更适合与钙离子激活发光蛋白共用。据报道,Coelenterazine h的发光强度高于天然腔肠荧光素10-20倍,因此是用来检测钙离子浓度微小变化的有力工具。
Coelenterazine 400a: BRET研究中Rluc的首选底物此腔肠素衍生物在390 nm400nm之间发蓝色光,对GFP acceptor的光发射干扰最小。
1)Coelenterazine(天然腔肠荧光素)
分子式:C26H21N3O3 分子量: 423.48 g/mol 纯度:95%保存: -15°C避光,保存在惰性气体下
Protocol:发光检测实验
1)使用管光度计室温下定量检测发光情况,每个样品做三个平行;
2)加入底物10s内立即检测,integration time”1 s
3)对于细菌表达Gluc系统,甲醇溶解底物腔肠素制备10 mM储存液,终浓度为10μmol/L。储存液-20 °C保存,工作液制备过程需避光并置于冰上。
产品报价:

货号
规格
单价
CZ1
1MG
1800
Coelenterazine
CZ5
5MG
3600
Coelenterazine
CZ10
10MG
4500

2)Coelenterazine 400 a/腔肠素 400a
分子式:C26H21N3O分子量:: 391.48 g/mol纯度:95%
储存液制备:
1)开封前将瓶子放到室温温育,以避免产品发生任何的冷凝;
2125 μL无水乙醇溶解50 μg Coelenterazine 400 a,最终浓度是0.4μg/μL. ,轻轻混匀;(注:避免用DMSO或其他溶剂来溶解腔肠素400a,因为试剂可能被氧化)
3)分装后避光保存在-20°C,保持干燥
产品报价:

名称
货号
规格
单价
Coelenterazine 400a
C-320-1
1MG
2080
Coelenterazine 400a
C-320-5
5MG
6280
Coelenterazine 400a
C-320-10
10MG
10760

3Coelenterazine h/ 腔肠素hfrom Caliper LifeScience Inc.
RediJect Coelenterazine h为即用的注射型生物发光底物,特别设计用于体内成像研究。通过最小化产品成分的变化,最小化冻融次数和严格控制不同批次的产品,使用Caliper公司的Coelenterazine h确保客户得到高重复性的结果。
点:
预制配方,不同批次间严格控制特别设计用于体内研究;
即用型产品通过最小化预成像准备步骤,减少时间和精力;
每瓶可用于5只动物的成像研究;(10 /kit
IVIS成像系统验证,控制体内成像质量;
色:黄色溶液(溶于丙二醇/柠檬酸盐)
度:150 μg/mL 10瓶无菌溶液,每瓶含1.2 mL浓度为 150 μg/mL Coelenterazine h
存: Store at ≤ -70 °C
使用及注射剂量:
开始实验前,37 °C 水浴锅解冻,避免重复冻融。静脉注射(i.v.)或腹腔注射(i.p.)
1 静脉注射:推荐使用剂量15 μg/mouse(100 μL/mouse),用1 ml注射器直接从瓶内吸取溶液,然后用25 gauge或更高的针头注射入小鼠体内。尽快成像检测以获得峰值信号。
2 腹腔注射:推荐剂量是30 μg/mouse (200 μL/mouse),方法同上。
应用实例:
 
    
 
Figure 1.Rediject Coelenterazine has been optimized for in vivo use with IVIS imaging systems. (A) 5 pmol BRET Qdot 700* were injected intravenously in a nu/nu mouse. 10 minutes post BRET Qdot injection 15 μg/mouse Coelenterazine h was injected intravenously. Chart shows peak signal was observed right after injection at ~ 22 seconds followed by rapid clearance. Images were taken with IVIS kinectic. (B) 1,2 and 4 pmol BRET Qdot 655 were injected subcutaneously in a nu/nu mouse. 10 minutes post BRET Qdot injection 10 μg/mouse Coelenterazine was injected intraperitoneally. Chart shows that peak signal was reached around 27 minutes post i.p. injection of Coelenterazine.
产品报价:

名称
货号
规格
单价
1 kit10 vials
4863
Coelenterazine h 腔肠素h
21153
1mg
5145

 
首 页    |    关于诺宁    |    新闻中心    |    产品中心    |    服务中心    |    下载中心    |    代理品牌    |    精品推荐    |    联系我们
Copyright @ 2006 All Rights Reserved 上海诺宁生物科技有限公司版权所有 沪ICP备12009002号
地址:上海市徐汇区龙吴路2418弄58号501室 电话:021-61241614 18616364863
站长统计: 技术支持:网飙网络