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Roche地高辛标记试剂盒选择指南
发表日期:2012-5-30

 

Roche地高辛标记试剂盒选择指南
地高辛标记常用的方法如下:
DNA – PCR labeling,random primed labeling,Nick Translation
RNA- in vitro transcription
寡核苷酸- 3 End Labeling,3 Tailing
不同的标记方法各有差异,客户可根据起始模板浓度、模板是否需要纯化、探针检测浓度、探针应用等几个因素综合考虑,选择最佳的标记试剂盒,详见表1。
1 Roche地高辛标记试剂盒选择指南
标记方法(试剂盒名称)
方法优点
起始模板量
可检测的标记探针
探针应用
方法评论
PCR labeling
PCR DIG探针合成试剂盒
Cat#:11636090910
☆仅需少量的模板
☆甚至可用不纯的模板
☆相比于其他方法,需更少的优化步骤;
☆标记探针具高产量
☆推荐用于非常短的探针(<100 bp)
☆产生高灵敏度探针
☆质粒DNA,10-
100 pg(理想下用10 pg)
☆基因组DNA,1-
50 ng(理想状况下用10 ng)
0.10-0.03 pg DNA
基因组southern
☆northern
☆也可用于dot/slot、文库筛选和原位杂交
开始标记反应前在无
DIG-dUTP的情况下,优化PCR
模板浓度对产生灵敏度探针
非常
重要
☆使用更少的DIG标记长探针
(>1 kb)
☆勿用PCR DIG标记混合物
(DIG-dUTP:dTTP=1:20)替换试剂盒
内的标记混合(DIG-dUTP:dTTP=1:3)
Random primed labelinghigh efficiency
DIG-high prime DNA标记与检测起始试剂盒I
Cat#: 11745832910
DIG-high prime DNA标记与检测起始试剂盒II
Cat#: 11585614910
☆产生非常敏感的探针
反应可扩大十倍
☆ 300ng DNA(针对可检测单拷贝基因的探针)
☆若标记反应反应过夜,模板量可更低
0.10-0.03 pg DNA
基因组southern blots
☆文库筛选
☆也可用于dot/slot blots、northern blots
☆需要高纯度的模板
☆非常敏感于不纯的模板
☆用水或Tris buffer重悬模板。
勿用TE,因EDTA会一直标记反应
Nick Translation
允许控制探针长度(原位杂交实验非常重要)
☆ 1 μg DNA
主要用于原位杂交;灵敏度因检测方法而异;
☆原位杂交
☆需要高纯度的模板
☆标记前模板不要变性
RNA labeling
DIG Northern 起始试剂盒Cat#:12039672910
产生大量标记
☆标记探针完全不含载体序列
☆RNA探针是单链
☆RNA探针用于northen印迹灵敏度比DNA探针高
☆原位杂交实验中DIG-标记的RNA探针可轻易片段化
☆质粒DNA,线性化:1 μg
☆带启动子PCR
产物:100-200 ng
0.10–0.03 pg DNA
0.10–0.03 pg RNA
☆Northern
☆原位杂交
☆文库筛选
☆Dot/slot
☆需要高纯度模板
3 End Labeling
DIG 寡核苷酸3末端标记试剂盒,第二代
Cat#:03353575910
仅需要少量的模板
反应可无限扩大
☆100 pmol寡核苷酸
10 pg DNA
☆文库筛选
☆Dot/slot bl
☆原位杂交
寡核苷酸应用HPLC或Elutips(Schleicherand Schuell)纯化
☆探针不用纯化即可用于下游实验
3 Tailing
DIG管核苷酸尾标记试剂盒,第二代
Cat#:03353583910
仅需少量模板
相比于末端标记法产生更灵敏的探针
☆反应可无限扩大
100 pmol寡核苷酸
1 pg DNA
文库筛选
☆Dot/slot
☆原位杂交
☆寡核苷酸应用HPLC或Elutips(Schleicherand Schuell)纯化
☆探针不用纯化即可用于下游实验

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