Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000 线性PEI转染试剂

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Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000 线性PEI转染试剂

Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000 线性PEI转染试剂
货号:NBS2500-1ml,
NBS2500-10ml,
NBS2500-50ml,
品牌:NoninBio
促销: 240.00~980.00
价格: 300.00~1225.00
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1ml 10ml 50ml

Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000线性PEI转染试剂

Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000 线性PEI转染试剂

货号:NBS2500-1ml,

NBS2500-10ml,

NBS2500-50ml,

品牌:NoninBio


产品描述

线性化聚乙烯亚胺PEI 25000,一种高电荷阳离子聚合物,非常容易结合于高电荷阴离子基质。工业应用上,线性化PEI可改善负电荷染料的物理外观,以调整染料的化学特性和增强染料与固相基质的黏附能力,常用作黏附增强剂,作用同多聚赖氨酸(poly-lysine);科研应用上,线性化PEI能与DNA或其他负电荷生物大分子简单结合,正是这一特性,使得成为一种非常行之有效的载体运输介质(Vector carrier),即转染试剂。

线性化聚乙烯亚胺PEI 25000(Polyethylenimine Linear, MW 25000)是一款优秀、低成本、值得信赖的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,PEI在宽广的生产规模内(从96孔板到100L生物反应器)能提供连续性的高基因表达。

本品是PEI 25K的无菌溶液,浓度为1mg/ml,直接使用即可。按照DNA:PEI 25K=1:3的比例来操作,1ml本品足以用来转染330μg DNA,或者,6孔板内约做80-160次转染。

保存与运输方法

保存:-20℃保存,1年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1)收到本品或第一次使用,请根据单次用量分装后置于-20℃冻存,尽量降低反复冻融次数。

2)本品为无菌溶液,请操作过程中执行无菌操作。

3)请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度,260nm / 280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

4)使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。

5)对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

6)对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。

7)推荐用商业化的无血清培养基比如Opti-MEM I来稀释DNA和PEI 25K,制备转染复合物。

8)转染过程请不要使用抗生素。

9)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

一、操作方法(贴壁细胞)

1.1铺板

a)转染前18-24h进行铺板,调整合适的细胞密度(参考表1),使其在转染时细胞密度达60-80%。

【注意】:高血清水平会抑制转染效率,大多数情况,低血清水平(≤5%)能产生最高的转染效率。

1.2转染步骤(以6孔板的单孔为例)

a)转染前1-2h,每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b)制备PEI 25K-DNA转染复合物(严格按照以下步骤进行):①往300μl无血清培养基(比如:Opti-MEM I)加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀;②往混合物内加入8μl PEI 25K(1mg/ml)(DNA/PEI 25K=1:4),低速涡旋5s;③无菌环境,室温静置30min以形成PEI 25K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次,轻轻混匀。

c)将PEI 25K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,使得复合物分散均匀。

【注意】:以上步骤可通过调整PEI 25K-DNA复合物在无血清培养基内的体积(为培养总体积的10%)来进行放大或缩小(可参考表2)。

1.3 孵育

a)37℃,5% CO2培养箱内培养细胞,转染后12-18h,去除含PEI 25K-DNA复合物的培养液,更换新鲜的生长培养基。

b)通常,转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

 

PEI 25K客户使用案例(逐步增加中)

图片描述:以人结肠癌细胞(HCT116)为对象,按照质粒DNA:PEI 25000=1:4的比例制备转染混合物并转染进入HCT116细胞,36h后于荧光显微镜下观察转染效率(GFP,绿色荧光蛋白)。



订购信息

产品名称

产品编号

规格

促销价格(元)

Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000

线性PEI转染试剂

NBS2500-1ml

1ml

240

NBS2500-10ml

10ml

680

NBS2500-50ml

50ml

980