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LPS Extraction Kit 脂多糖提取试剂盒
发表日期:2013-3-19

 

LipopolysaccharideLPSExtraction Kit

产品信息:
产地
产品编号
产品名称
包装
促销价(元)
17141
100次
1400.00
试剂盒组成
组分
名称
规格
保存方法
1
1x 100 ml
2~8
2
1x 80ml
2~8
LPS背景描述
◆ 脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要成分,结构很复杂、热稳定性极高(在250℃下干热灭菌2h才完全灭活)。受LPS发现的历史原因,如今LPS的概念几乎等同于内毒素(endotoxin)。LPS由多糖链和脂质A组成,不同细菌间的多糖链是高度变化的,决定细菌的血清型;而脂质A主要影响LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的级联反应和机体的毒性病理生理活动,包括释放内毒素引起感染性休克从而导致末梢血管虚脱。临床常通过检测LPS的存在来诊断脑膜炎。
正是LPS与机体免疫机能的密切关系,生命科学研究常常提取LPS进行相关的研究,如阐明LPS的结构,代谢,免疫学,生理学,毒性,生物合成途径;诱导生长促进因子如白介素的合成与分泌;诱导疾病研究的动物模型如炎症反应,急性肺损伤,
产品描述:
◆ 最常用的LPS提取方法仍然是Westphal,O. (1965)使用的热酚-水法(hot phenol-water method),主要优势在于高产量,但是提取步骤繁琐,费时,以及常受蛋白质和核酸的污染,纯度低等缺点也常困扰科研工作者。
◆ iNtRON提供的LPS提取试剂盒是市场上的第一个商品化的产品,排除传统热酚-水法的缺陷,使得科研工作者能够快速方便的从细菌中提取LPS。
产品优势:
适用性广,能从所有G- 菌中提取LPS(见Fig. 2);
操作时间短(包括裂解在内,60min内即可完成);操作简单方便;
少量细菌即可获得足够的LPS;LPS产量与细菌培养物成正比,一般使用3~5ml培养物LPS产量最高;细菌最佳培养体积1~2ml(OD600=0.8-1.2
LPS产率高,且重复性好(见Fig.1);
提取LPS下游应用广,包括直接用于免疫刺激;
操作步骤:
1)室温离心收获细菌细胞,13,000rpm,30sec。
2)加入1ml裂解缓冲液(Lysis Buffer),剧烈涡旋混匀。
3)加入200μl氯仿,剧烈涡旋混匀10-20 sec,室温孵育5min。
4)4℃,13,000rpm离心10min,转移400μl上清到新1.5ml离心管中。
5)加入800μl纯化裂解液(Purification Buffer),并混匀。-20℃孵育10min。
6)4℃,13,000rpm离心15min。
7)用1ml 70%EtOH洗涤LPS颗粒,并完全干燥。
8)在LPS中加入70μl Tris-HCL(10mM,pH8.0),并超声。
应用图片:
应用文献:
1) YanH.L, et al. DNA Sequencing and Identification of Serogroup-Specific Genes in the Escherichia coli O118 O Antigen Gene Cluster and Demonstration of Antigenic Diversity But Only Minor Variation in DNA Sequence of the O Antigen Clusters of E. coli O118 and O151. Foodborne Pathogens and Disease. 5(4): 449-457(2008).
2) HA Shui, et al. LPS-evoked IL-18 expression in mesangial cells plays a role in accelerating lupus nephritis. Rheumatology 46:1277–1284(2007).
3) R Bucki, et al..Release of the antimicrobial peptide LL-37 from DNA/F-actin bundles in cystic fibrosis sputum. European Respiratory Journal 29:624-632 (2007).
4) BH.Kim, et al. Effect of retinoids on LPS-induced COX-2 expression and COX-2 associated PGE2 release from mouse peritoneal macrophages and TNF-α release from rat peripheral blood mononuclear cells. Toxicology Letters 150(2):191-201(2004).
5) Anat Lerner, et al. The Azospirillum brasilense Sp7 noeJ and noeL genes are involved in extracellular polysaccharide biosynthesis. Microbiology 155: 4058–4068(2009).
6) Chitrita DebRoy, et al. Multiplex Polymerase Chain Reaction Assay for Detection of Nonserotypable Shiga Toxin–Producing Escherichia coli Strains of Serogroup O147. Foodborne Pathogens and Disease 7(11): 1407-1414(2010).
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